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人Elisa試劑盒與溫度的關(guān)系要弄清

更新時間:2015-03-03   點擊次數(shù):1650次
   人Elisa試劑盒繼50年代的免疫熒光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后,在70年代初期又建立了用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。由于酶的生物催化作用,一個酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個底物分子發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生了放大作用,人Elisa試劑盒使得原來極其微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識別出來,這種技術(shù)被稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗法(Enzyme—Linked Immunosorbent Assay,ELISA),本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相繼分別報道后,現(xiàn)已引起廣泛重視。人Elisa試劑盒是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。人Elisa試劑盒本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。
  因此人Elisa試劑盒在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個方面:
  1.免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
  2.研究抗酶抗體的合成。
  3.顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
  4.定量檢測體液中抗原或抗體成份。
  人Elisa試劑盒濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至劃定的溫度,特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如斯??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在人Elisa試劑盒中似不恰當(dāng)。這就是為什么ELISA反應(yīng)老是需要一定時間的溫育。為加速反應(yīng),可進(jìn)步反應(yīng)的溫度,有些試驗在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度。人Elisa試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。
  酶聯(lián)免疫吸附試驗法以其靈敏度高(可達(dá) ng 甚至pg 水平),特異性好等優(yōu)點,在生命科學(xué)各領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,人Elisa試劑盒已邁出醫(yī)藥、臨床領(lǐng)域,步入農(nóng)業(yè)、漁業(yè)、畜牧業(yè)和食品加工業(yè)。低濃度的酶標(biāo)抗體極容易受到高溫、微生物、以及蛋白酶的影響而失活,嚴(yán)重影響產(chǎn)品的貨架期,過去通常將酶標(biāo)抗體凍干保存,然而這樣的保存,不僅由于在凍干的過程中會影響酶標(biāo)抗體的活性,人Elisa試劑盒而且在臨床應(yīng)用中頗為不便。適當(dāng)?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標(biāo)抗體的活性起一定的保護(hù)作用,因此我們設(shè)計了一組保護(hù)劑用于保護(hù)酶標(biāo)抗體,與未添加任何糖蛋白的酶標(biāo)抗體做對照,將經(jīng)保護(hù)的人Elisa試劑盒酶標(biāo)抗體及未保護(hù)的酶標(biāo)抗體置于37℃烘箱中放置6天,考察保護(hù)液對酶標(biāo)抗體的影響。
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